蛋白质组学分析服务

2022-08-03

      服务介绍


        毛细管区带电泳-电喷雾电离-串联质谱(CZE-ESI-MS/MS)技术适用于各种蛋白质学的分析研究。在蛋白质组学分析中存在两种主要的研究思路:自下而上(Bottom-up)蛋白质组学和自上而下(Top-down)蛋白组学研究。由于毛细管电泳可以实现多肽和蛋白的高效分离,而且通过永道致远研发的CE-MS联用离子源可以得到极高的检测灵敏度。另外,毛细管电泳所需的样本量极少,适合于珍贵生物样本的分析。由于独特的分离机制,毛细管电泳不仅可以检测到二肽,三肽等在液相色谱上无法保留的极性小肽,也可以获得C18填料上难以洗脱的弱极性多肽的一级和二级质谱信息。CE-MS能够得到LC-MS难以获取的独特蛋白质组学信息。


      技术路线


      对于自下而上(Bottom-up)蛋白质组学,需要进行细胞裂解、蛋白提取、蛋白变性、还原、烷基化、特异性内切酶酶解等样本处理步骤,采用CE-MS联用技术可以对样本进行数据依赖性(DDA)或数据非依赖性采集(DIA)。通过蛋白质组学软件,对一级和二级质谱数据进行蛋白搜库,亦可进行标记(TMT,iTRAQ)或非标记定量(LFQ)分析。对于自上而下(Top-down)蛋白质组学,需要进行细胞裂解、蛋白提取等样本处理步骤,通过CID或ECD/ETD等碎裂模式,对完整蛋白进行MS/MS分析,通过蛋白质组学软件,对一级和二级质谱数据进行蛋白搜库,从而完成对蛋白分子的鉴定工作。


    技术优势


      1.对于酶切产生的二肽,三肽等在液相色谱上无法保留的极性小肽,通过CE-MS可以获得很好的检测。

      2.对于C18等液相色谱填料难以洗脱的弱极性多肽,通过CE-MS可以获得很好的检测。

      3.相比LC,CE更适合于复杂体系中的蛋白混合物的分离,而且永道致远CE-MS联用离子源可以获得 更高的蛋白灵敏度,非常适合自上而下蛋白质组学的分析。

      4.CE-MS不仅灵敏度高,而且所需样本量极少,适用于单细胞或极微量的珍贵样本的检测。

      5.CE-MS与 LC-MS相比,受到的基质效应(例如离子抑制和增强)的影响较小。